Entre no mundo da quimioluminescência

O que é quimiluminescência

O termo "quimiluminescência" foi cunhado pela primeira vez por Eilhardt Weidemann (1888). A quimioluminescência, fenômeno observado quando um produto que foi estimulado exogenamente para um estado excitado relaxa até seu estado fundamental e emite fótons, pode ser definido em termos simples: a emissão de luz em uma reação química.

Antecedentes Históricos da Quimiluminescência

Um avanço em relação aos imunoensaios tradicionais foi o trabalho pioneiro de Yalow e Berson, os cientistas americanos que utilizaram pela primeira vez o radioimunoensaio (RIA) para a determinação da insulina em 1959. Desde a década de 1970, vários métodos sem radiomarcação foram gradualmente desenvolvidos. Em 1977, Tsuji et al. desenvolveram um imunoensaio não radiomarcado baseado nos princípios básicos do radioimunoensaio, usando luminol marcado como sinal traçador. A quimioluminescência das enzimas foi combinada com a reação imunológica para desenvolver o imunoensaio de quimioluminescência (CLIA).

Vantagens da tecnologia de imunoensaio quimioluminescente

As vantagens do CLIA sobre RIA, EIA e FIA ​​são

(1) Sem risco de radiação;

(2) Alta sensibilidade, com faixa linear de detecção de 6 ordens de grandeza e limite inferior de 10-21 mol;

(3) Marcadores luminescentes estáveis ​​com longa validade;

(4) Fácil operação automatizada;

(5) Ampla gama de aplicações, pode detectar antígenos, semiantígenos e anticorpos de diferentes tamanhos moleculares, podendo também ser usado para a detecção de sondas de ácido nucleico.

Princípios Básicos do Imunoensaio de Quimiluminescência

A análise de quimioluminescência é uma combinação de quimioluminescência e imunoensaio. Oferece tanto a alta sensibilidade da quimioluminescência quanto a alta seletividade do imunoensaio. CLIA envolve a marcação de um antígeno ou anticorpo com um reagente quimioluminescente (luminol ou catalisador, etc.), a marcação do antígeno/anticorpo e da substância a ser medida após uma série de etapas imunológicas e físico-químicas (centrifugação, lavagem, etc.). ), e a determinação final da substância a ser medida na forma de intensidade de luminescência.
Tomemos como exemplo a metodologia de luminescência direta do éster de acridina de Getein: os anticorpos são marcados separadamente com éster de acridina e esferas magnéticas, e após a reação imunoconjugada entre o anticorpo marcado e o antígeno na substância a ser testada, um anticorpo-antígeno revestido com esferas complexo de anticorpo marcado com éster de acridina é formado. Tudo o que é necessário é a adição de um agente oxidante para criar um ambiente alcalino com NaOH, e a anacorita de acridina pode então emitir luz diretamente. A energia do fóton produzida por unidade de tempo é registrada e a quantidade da substância a ser medida pode ser calculada a partir da curva padrão.

Principais tipos de imunoensaios quimioluminescentes

Dependendo do marcador, o CLIA pode ser dividido em três categorias principais: quimioluminescência direta, quimioluminescência enzimática e imunoensaios por eletroquimioluminescência.

Quimioluminescência direta

Os reagentes quimioluminescentes de luminol e acridina são os marcadores de luminescência mais comumente usados.

Luminol, Isoluminol e seus derivados foram uma das primeiras substâncias luminescentes comuns usadas no CLIA e a luminescência dessas substâncias é oxidativa. Sob condições alcalinas, é oxidado por H2O2 sob catálise HBP para produzir um intermediário excitado, que emite um fóton quando a fase retorna ao estado fundamental.

Em 1935, descobriu-se que a lucigenina tinha propriedades quimioluminescentes e, mais tarde, descobriu-se que muitas acridinas tinham essa propriedade. Esses compostos podem produzir quimioluminescência rapidamente com altos rendimentos quânticos, desde que estejam na presença de H2O2 e OH-. A química dos ésteres de acridina como marcadores para imunoensaios é simples, rápida, não requer catalisador e possui alta eficiência de marcação e luminescência.

O mais novo produto da Getein, o MAGICL 6000, é um instrumento de quimioluminescência compacto e totalmente automatizado que utiliza esse marcador para melhorar significativamente a eficiência do uso final, mantendo a precisão e a sensibilidade e tem sido usado em uma ampla gama de aplicações em 13 áreas, incluindo tumor, tireoide e marcadores cardíacos. 

Imunoensaio Enzimático de Quimiluminescência (CLEIA)

CLEIA é um imunoensaio enzimático do ponto de vista da marcação do imunoensaio, exceto que o substrato para a reação enzimática é o luminol: a enzima marca a substância biologicamente ativa para o imunoensaio, a enzima no complexo de imunoensaio atua então no substrato de luminol e o sinal de luminol é medido para análise quantitativa.

Atualmente, os marcadores comumente utilizados são HRP e ALP, ambos com substratos luminescentes próprios.

Imunoensaio por eletroquimioluminescência (ECL)

ECL é um processo de quimioluminescência causado por uma reação eletroquímica. Quando uma certa tensão ou corrente é aplicada a um eletrodo, ocorre uma reação eletroquímica no eletrodo, e os produtos da reação entram no estado excitado por reação química entre os produtos da reação do eletrodo, ou entre os produtos da reação do eletrodo e um componente da solução, e a luminescência é produzida quando o estado excitado retorna ao estado fundamental.

CLIA tem as vantagens de alta sensibilidade e boa especificidade e é cada vez mais favorecida por testes clínicos. Além disso, o CLIA possui uma ampla gama de métodos analíticos e é amplamente utilizado para o imunoensaio de antígenos, anticorpos e semiantígenos, e sua faixa linear é relativamente ampla para atender às necessidades clínicas. Getein agora oferece um menu abrangente de mais de 100 ensaios de marcadores em 13 campos. A automação completa do processo e um design de depósito duplo de consumíveis permitem trocas ininterruptas de consumíveis, possibilitando melhor eficiência do ensaio; com uma velocidade de medição de 150 T/H, ao mesmo tempo que garante análises precisas de sangue total, fornece aos laboratórios uma solução de quimioluminescência compacta e inovadora.